Blade için işleri daha da zorlaştıran şey, vampir liderliğinin, bir çamur atma kampanyası başlatarak, kendisini katil bir canavar olarak hedef göstermesi ve FBI'ı peşine takmasıdır. Blade ve akıl hocası Whistler'ın (Kris Kristofferson), FBI ajanı Cumberland (James Remar) ve adamlarıyla yaşadıkları çarpıcı karşılaşmadan sonra, Gündüz Yürüyen'in yardıma ihtiyacı olduğu kesinleşir. Blade istemeden de olsa, Whistler'ın güzel kızı Abigail (Jessica Biel) ve ukala Hannibal King'in (Ryan Reynolds) yönetimindeki vampir avcısı grubu Gece Avcıları'yla işbirliği yapar.

Grubun kör bilimcisi Sommerfield (Natasha Lyonne) vampir sorununa nihai bir çözüm ararken, Gece Avcıları da Dracula'nın ölümsüzler çetesine karşı bir dizi kanlı çatışmaya girmiştir. Vampirlerin başında güçlü dişi vampir Danica Talos (Parker Posey) ile acımasız yardımcıları Asher (Callum Keith Rennie) ve Grimwood (profesyonel Amerikan güreşçisi Triple H) bulunmaktadır. En sonunda, Blade kendini tüm zamanların en büyük vampiriyle karşı karşıya bulur. Hem kendi, hem de tüm insanlığın kaderi artık ona bağlıdır.